体外药物筛选

哮喘模型药物评价

哮喘是一种由多种炎症细胞及炎症介质参与的气道慢性炎症性疾病,气道炎症、平滑肌功能紊乱和气道重塑是哮喘的主要病理改变,发病率呈逐年增加趋势。

实验步骤:
1.明矾致敏佐剂:10% 明矾溶液(溶于双蒸水)2ml 500ug/ml OVA(溶于PBS2ml等量混合后,用NAOHPH值为6.5,室温孵育60min750r/min,离心5min,去掉上清液,重溶于2ml PBS。致敏时每只小鼠腹腔注射200ul,其中含2mg明矾和100ug OVA
2.致敏:小鼠分别于第014天时腹腔注射明矾致敏佐剂0.2ml,对照组注射相同剂量的PBS溶液,正常饮食饲养。
3.激发:雾化吸入,第21天时小鼠放入有机玻璃箱,5%OVA雾化吸入。每天30min,共7d,最后一次致敏后24h内检测。以小鼠出现烦躁不安、呼吸急促、腹肌痉挛等阳性反应作为造模成功的标准。对照组采用PBS雾化吸入,其他操作均相同。
4.末次激发24h麻醉小鼠,摘眼球取血,室温静置2h后于43000r离心10分钟提取血清,放入-80冰箱冻存。取左肺组织于4%多聚甲醛溶液中固定用于病理染色;右肺组织液氮冷冻,-80℃保存用于分生标本。

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